本試驗(yàn)為分析免疫質(zhì)量，及時(shí)掌握流行病學(xué)動(dòng)態(tài)和免疫效果，我公司在河北省石家莊市和邢臺(tái)市選取兩個(gè)蛋雞場(chǎng)，對(duì)我公司重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)抗體的血清學(xué)進(jìn)行連續(xù)性的監(jiān)測(cè)，以此掌握我公司重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株) 抗體消長(zhǎng)規(guī)律、產(chǎn)生時(shí)間、抗體高度及持續(xù)時(shí)間等效果。

1 材料和方法

1.1 供試材料

哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)滅活疫苗。

抗體監(jiān)測(cè)試劑 禽流感H5N1 Re-7株和Re-6株抗原及陽性血清，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供，紅細(xì)胞懸液是哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司質(zhì)量管理部提供的SPF級(jí)公雞紅血球。

1.2 疫苗效力檢測(cè)

取4周齡SPF雞35只（由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司SPF雞場(chǎng)提供），分成兩組，一個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組20只，對(duì)照組15只，實(shí)驗(yàn)組注射哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司禽流感H5亞型二價(jià)滅活疫苗，每只肌肉注射疫苗0.5ml。21日后，實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組分別采血，分離血清，分別用國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室提供的針對(duì)禽流感病毒Re-6株和Re-7株免疫抗體的2種H5亞型抗原測(cè)定HI抗體。

1.3試驗(yàn)雞群

選擇4周齡未經(jīng)禽流感疫苗免疫的商品蛋雞（海蘭白）在河北省石家莊(A場(chǎng))和邢臺(tái)市（B場(chǎng)）兩個(gè)蛋雞場(chǎng)（15000羽左右），免疫哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司禽流感H5亞型二價(jià)滅活疫苗。雞群在同一管理?xiàng)l件下進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.4 免疫劑量及方法 按照種雞場(chǎng)提供免疫程序，實(shí)驗(yàn)組于4周齡首免，頸部皮下注射0.3 mL／羽；8周齡二免，胸部肌肉注射0.5 mL／羽。

1.5 HI抗體效價(jià)測(cè)定 雞群于4周齡（首免當(dāng)天）、6周齡、7周齡、8周齡(二免當(dāng)天)、9周齡、10周齡、12周齡、14周齡、17周齡、20周齡、23周齡、26周齡，每組隨機(jī)選取150只雞翅靜脈采血，離心制備血清并按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)( HI )進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.6檢測(cè)試劑和檢測(cè)方法

試驗(yàn)均用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)( HI )進(jìn)行抗體檢測(cè)，待檢血清HI抗體滴度大于或等于6log2時(shí)為抗體合格。 

2 結(jié)果

2.1疫苗效力檢驗(yàn)結(jié)果見表1，對(duì)照組為陰性，免疫雞Re-6株、Re- 7株HI抗體幾何平均滴度（GMT）≥6log2為合格產(chǎn)品。

表1 疫苗效力檢測(cè)結(jié)果（log2）

2.2 石家莊與邢臺(tái)市兩個(gè)蛋雞場(chǎng)免疫疫苗后，均未見明顯不良反應(yīng)，雞群狀態(tài)良好，測(cè)定雞群禽流感Re-6株、Re-7株HI抗體效價(jià)，并分別計(jì)算平均值，結(jié)果見表2，繪制抗體消長(zhǎng)折線圖，見圖1、圖2。

表2 禽流感H5N1亞型Re-6株及Re-7株HI抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)結(jié)果（log2）

由圖1、圖2可見，四周齡雛雞禽流感母源抗體為零或極低，首免后2周，A場(chǎng)組、B場(chǎng)組Re-6株、Re-7株抗體效價(jià)達(dá)到6log2，3周各組均達(dá)到首免后的抗體高峰，Re-6株抗體6.9~8log2，Re-7株抗體8~8.4log2。首免高峰后抗體效價(jià)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，于8周齡二免后，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組抗體效價(jià)迅速上升，其中A場(chǎng)組抗體效價(jià)上升速度最快，6周后（14周齡）達(dá)到二免抗體高峰且峰值最高，Re-6株抗體達(dá)到11.6log2，Re-7株抗體達(dá)到11.4log2；B場(chǎng)組抗體上升速度、峰值次之，于二免后9周達(dá)到抗體高峰。達(dá)到峰值后各實(shí)驗(yàn)組抗體效價(jià)平穩(wěn)下降，二免后18周，A場(chǎng)組與B場(chǎng)組Re-6株、Re-7株抗體效價(jià)略高于6log2，二免后合格抗體可持續(xù)16~18周。

2.3 抗體顯著性檢驗(yàn)（t 檢驗(yàn)）A場(chǎng)與B場(chǎng)采樣點(diǎn)之間差異顯著(P<0.05)，A場(chǎng)與B場(chǎng)差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

雞群HI抗體效價(jià)幾何平均數(shù)達(dá)到4log2可判定為免疫合格，據(jù)有關(guān)資料，HI抗體效價(jià)達(dá)到4log2時(shí)有保護(hù)力，但有時(shí)能分離到病毒，當(dāng)達(dá)到5log2以上時(shí)，可完全保護(hù)，并且分離不到病毒。綜合考慮現(xiàn)地實(shí)際與滅活疫苗抗體產(chǎn)生規(guī)律，對(duì)于商品蛋雞，現(xiàn)地應(yīng)用中以6log2作為抗體合格值及免疫臨界值為宜。

在現(xiàn)地應(yīng)用中，個(gè)別養(yǎng)殖戶及養(yǎng)殖場(chǎng)不重視禽流感疫苗的免疫，在商品蛋雞開產(chǎn)前僅進(jìn)行一次或兩次重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)免疫，本次試驗(yàn)由于現(xiàn)地條件限制，僅進(jìn)行了兩次禽流感疫苗免疫，由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可看出，商品蛋雞在開產(chǎn)前進(jìn)行一次免疫，抗體峰值較低且下降較快；若進(jìn)行兩次免疫，二免合格抗體可持續(xù)16~18周左右，這意味著產(chǎn)蛋雞群在5~6月齡產(chǎn)蛋率上升期及高峰期，HI抗體效價(jià)將降至免疫臨界值，如果此時(shí)進(jìn)行加強(qiáng)免疫將對(duì)產(chǎn)蛋率產(chǎn)生較大影響。因此根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果建議商品蛋雞在開產(chǎn)前進(jìn)行三次H5型禽流感疫苗免疫，15~30日齡進(jìn)行首免，45~60日齡進(jìn)行二免，開產(chǎn)前進(jìn)行三免，按照此程序，合格抗體可較好的保護(hù)產(chǎn)蛋高峰期。建議有條件的雞場(chǎng)在產(chǎn)蛋期定期進(jìn)行禽流感HI抗體監(jiān)測(cè)，根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果及時(shí)進(jìn)行免疫，同時(shí)也應(yīng)做好H9型禽流感疫苗免疫。