針對客戶在使用哈藥疫苗布氏菌病試管凝集試驗抗原產品時，總是出現不會操作及操作不當的問題，導致試驗結果不理想，現整理了布病試管凝集試驗的操作過程，供廣大客戶參考。

一、 實驗前準備

1、 試管的準備

① 把試管浸泡于帶有洗滌劑的溫水中30分鐘，浸泡后用試管刷將其刷干凈。先用自來水沖洗10遍，再用去離子水沖洗1遍。

② 試管沖洗干凈后倒置于籃子中，等水瀝干后置干燥箱中，160℃干燥3個小時。

③ 實驗前準備0.5%的石炭酸生理鹽水。

2、試劑的準備

①標準抗原:按照說明書使用。使用時充分搖勻，用稀釋液作1：20(工作濃度)稀釋。

②標準陽性血清凍干品，使用前用蒸餾水溶解至規(guī)定容積。

③標準陰性血清凍干品，使用前用蒸餾水溶解至規(guī)定容積。

3、被檢血清

①按常規(guī)方法采血分離血清

血清必須新鮮，無明顯蛋白絮凝物、無溶血和無腐敗氣味。

②運送和保存血清樣品

防止血清凍結和受熱，以免影響凝集價。

二、試驗操作過程

1、確定被檢血清的稀釋度

牛、馬、駱駝稀釋用1:50,1：100,1：200,1：400(4個稀釋度);豬、山羊、綿羊和狗用1：25,1:50,1:100,1:200(4個稀釋度)。大規(guī)模檢疫時也可用2個稀釋度，即牛、馬、駱駝用1：50,1：100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25,1:50,為測定強陽性血清效價，稀釋度可以增加。

2、稀釋被檢血清—豬、山羊、綿羊和狗血清的稀釋。

①每份被檢血清用4支試管，標記檢驗編號后第I管加1.15 mL稀釋液，第2-4管各加人0.5 m L稀釋液。

②取被檢血清0.1 mL，加人第1管，充分混勻后吸棄0.25 mL。

③從第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均勻后，再從第2管吸取0.5 m L至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去0.5 mL，稀釋完畢。

④從第1至第4管的血清稀釋度分別為1：12.5,1：25,1：50,1：100。

3、加抗原

將0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，豬、羊或狗的血清稀釋則依次變?yōu)? : 25,1 : 50,1 : 100,1：200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變?yōu)?：50,1：100,1：200,1:400。各反應管反應總量為1 mL。

4、設立對照—每次試驗都應設立下列對照。

①陰性血清對照

陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清同。

②陽性血清對照

陽性血清的最高稀釋度應超過其效價滴度，加抗原的方法與被檢血清同。

③抗原對照

在0. 5mL稀釋液中，加0.5 m L抗原(1：20)

5、比濁管的配置

每次試驗均須配制比濁管，作為判定凝集反應程度的依據，先將抗原(1: 2 0)用等量稀釋液作一倍稀釋，然后按表1配制比濁管。

                                                                            表 1比 濁 管 的 配 制

6、感作（反應）

所有試驗管充分震蕩后，置37℃溫箱感作20小時。

7、結果判斷

確定每份被檢血清效價：比照比濁管判讀，出現++以上凝集現象的最高血清稀釋度為血清凝集價。

① 結果判定

當陰性血清對照和抗原對照不出現凝集，陽性血清的凝集價達到其標準效價士1個滴度，則證明試驗成立，可以判定。否則，試驗應重做。

②牛、馬和駱駝于1:100。血清稀釋度，豬、山羊、綿羊和狗于1:50血清稀釋度出現“++”以上的凝集現象時，被檢血清判定為陽性反應。

三、試驗后的處理

1、試管的處理

把所用試管必須高壓處理（121℃高壓30分鐘），然后用自來水徹底洗涮干凈，再用去離子水沖洗，后放置框中瀝干，干燥（160℃干燥3個小時），保存?zhèn)溆谩?

2、 配置好而未用完的抗原及其盛裝其瓶子的處理

瓶子連其抗原一同高壓滅菌（121℃高壓30分鐘），后清洗干凈以備用。

3、 試管架的處理

把試管架上帶有樣品標記的符號用無水乙醇徹底清除掉，后用自來水把試管架沖洗干凈，晾干、保存?zhèn)溆谩?

四、哈藥疫苗布氏菌病試管凝集試驗產品

   規(guī)格：

抗原：10 ml/瓶

陽性血清：1.0 ml/瓶

陰性血清： 2.0ml/瓶

包裝：

5瓶/盒、10瓶/盒、20瓶/盒。

貯藏與有效期：

抗原2～8℃保存，有效期為18個月。期滿后測定效價，如果符合標準，可延長6個月。 

陰、陽性血清液體制品2～8℃保存，有效期陽性血清為12個月，陰性血清為24個月；凍干制品8℃以下保存，有效期均為120個月。