[前言]痢菌凈學(xué)名乙酰甲喹，是我國(guó)研制的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的獸用抗菌藥品,能抑制菌體的脫氧核糖核酸合成.本品抗菌譜廣，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均有較強(qiáng)的抑菌作用.不易產(chǎn)生抗藥性，價(jià)格低廉，在畜牧養(yǎng)殖業(yè)上應(yīng)用廣泛。但在使用過(guò)程中常因超劑量應(yīng)用導(dǎo)致中毒現(xiàn)象發(fā)生，造成不應(yīng)有的損失。到目前為止，痢菌凈損傷機(jī)體軟組織的機(jī)理尚未闡明。自由基醫(yī)學(xué)的發(fā)展為此方面的研究提供了新思路。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制不同水平的雞痢菌凈中毒模型，檢測(cè)機(jī)體的SOD、MDA、T-AOC，以期從痢菌凈影響機(jī)體自由基代謝和抗氧化系統(tǒng)功能角度闡述痢菌凈的中毒機(jī)理。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

選用40日齡健康雄性海蘭蛋雞，嚴(yán)格按常規(guī)飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)。將實(shí)驗(yàn)雞隨機(jī)分成3組，每組15羽。飼喂相同全價(jià)飼料。第Ⅰ組：正常對(duì)照組，飼喂正常的飼料拌料；第Ⅱ組：低劑量組，飼喂拌有400mg/kg的痢菌凈飼料，3次/d;第Ⅲ組:高劑量組,飼喂拌有600mg/kg的痢菌凈飼料,3次/d.飼喂3天.

1.2樣本的采集和檢測(cè)項(xiàng)目與方法

觀察臨床表現(xiàn)及剖檢變化。飼養(yǎng)至第3天時(shí)先心臟采血,析出血清.再采取胸腺、脾、法氏囊免疫組織備用。檢測(cè)項(xiàng)目方法：血清、胸腺、脾、法氏囊SOD、MDA、T-AOC、勻漿蛋白含量，分光光度計(jì)法。

1.3主要試劑與儀器

   主要試劑：SOD測(cè)定試劑盒，MDA測(cè)定試劑盒，T-AOC測(cè)定試劑盒，由南京建成生物工程所提供。主要儀器：731型分光光度計(jì)，

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1臨床表現(xiàn)及剖檢變化

臨床表現(xiàn)：高劑兩組和低劑量組雞表現(xiàn)精神沉郁，羽毛松亂，采食和飲水減少或廢絕，頭部皮膚呈暗紫色，排淡黃、灰白水樣稀糞。2日齡時(shí)部分雞出現(xiàn)癱瘓，兩翅下垂，逐漸發(fā)展成頭頸部后仰，彎曲，角弓反張、抽搐倒地而死。

剖檢變化：死亡后的雛雞脫水，肌肉呈暗紫色，腺胃腫脹，乳頭暗紅出血，肌胃皮質(zhì)層脫落出血、潰瘍。肝臟腫大，呈暗紅色，質(zhì)脆易碎。腎臟出血，心臟松弛，心內(nèi)膜及心肌有散在性出血點(diǎn)。腸道黏膜彌漫性充血，腸腔空虛，小腸前部有黏稠淡灰色稀薄內(nèi)空物，泄殖腔嚴(yán)重充血。

2.2SOD的檢測(cè)結(jié)果

由表1可知：各痢菌凈中毒組血清、胸腺、脾、法氏囊SOD均在不同程度地高于對(duì)照組。

                           表1SOD的檢測(cè)結(jié)果             單位：（μ/ml）                               

   注：同一列數(shù)值角碼字母相同者，表示兩組間差異不顯著。不同者，表示兩組間差異顯著，其中大寫(xiě)字母表示差異極顯著(p<0.01)，小寫(xiě)字母表示差異顯著（p<0.05）

2.3 MDA的檢測(cè)結(jié)果

由表2可知：各痢菌凈中毒組血清、胸腺、脾、法氏囊MDA均在不同程度地高于對(duì)照組，但在脾的低劑量組中與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

表2MDA的檢測(cè)結(jié)果             單位：（nmol/ml）

2.4 T-AOC的檢測(cè)結(jié)果

由表3可知：各痢菌凈中毒組血清、胸腺、脾、法氏囊T-AOC均在不同程度地高于對(duì)照組，在胸腺中毒組中第Ⅱ組與第Ⅰ組有顯著差異(P<0.05)，第Ⅲ組與第Ⅰ組差異極顯著(P<0.01)。

                            表3 T-AOC的檢測(cè)結(jié)果          單位：（μ/ml）     

3討論

  超氧化物歧化酶（SOD）對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著極其重要的作用，此酶能特異性地催化超氧陰離子自由基的歧化反應(yīng)。在正常生理?xiàng)l件卜，機(jī)體內(nèi)自由基不斷生成，又不斷被清除，生成與清除維持相對(duì)的動(dòng)態(tài)平衡，因而從整體上看顯示不出自山基對(duì)機(jī)體的氧化損傷或生理破壞作用。但是在殺菌藥物中毒下，譬如痢菌凈中毒，當(dāng)機(jī)體內(nèi)存在過(guò)量的藥物時(shí)，藥物中的有害物質(zhì)可迅速轉(zhuǎn)化為活性極強(qiáng)的自山基，使體內(nèi)自山基增多。過(guò)多的自山基超出機(jī)體的清除能力，破壞了體內(nèi)自由基產(chǎn)生與清除之間和動(dòng)態(tài)平衡，從而發(fā)生山過(guò)多自由基引起的一系列對(duì)機(jī)體有害的生理、病理改變。其中，脂質(zhì)的作用，主要是與質(zhì)膜中的多不飽和脂肪酸反應(yīng)，造成脂質(zhì)過(guò)氧化，其分解產(chǎn)物MDA可造成DNA分子鏈斷裂或堿基缺失，除形成致突變或致癌的病理學(xué)基礎(chǔ)外，也可自行破壞各種生物膜結(jié)構(gòu)的完整性，從而給機(jī)體細(xì)胞帶來(lái)嚴(yán)重的損害。胸腺和脾臟作為機(jī)體的主要免疫器官，在免疫系統(tǒng)功能的正常發(fā)揮起著十分重要的作用，當(dāng)任何因素使胸腺和脾臟受到損害時(shí)都會(huì)使細(xì)胞免疫和體液免疫的功能受到影響。而細(xì)胞免疫和體液免疫在全身防御、清除廢物以及防治腫瘤癌癥的發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用。

T- AOC是近幾年研究發(fā)現(xiàn)的用于衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)。T- AOC的大小可代表和反映機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)對(duì)外來(lái)刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝的狀態(tài)，其中的酶系統(tǒng)主要包括谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH- Px)、超氧化物歧化酶( SOD)、過(guò)氧化氫酶( CAT)等，非酶系統(tǒng)主要包括還原型谷胱甘肽( GSH) .VE .VC .VK .VA等維生素類、尿酸、血漿銅藍(lán)蛋自(CP) .胡蘿卜素、葡萄糖等，由于T-AOC具有很強(qiáng)的代表性，所以是機(jī)體反映機(jī)體抗氧化功能的一個(gè)良好指標(biāo)。

痢菌凈中毒時(shí)機(jī)體抗氧化能力降低，必然造成自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化物的蓄積，對(duì)機(jī)體造成一系列的損傷。如，破壞核酸和染色質(zhì):損害蛋白質(zhì)和酶，脂質(zhì)過(guò)氧化自山基從蛋白質(zhì)分子中奪取氫原子，形成蛋白質(zhì)自由基，進(jìn)一步引起蛋白質(zhì)聚合肽鏈斷裂，亦可使蛋白質(zhì)與脂質(zhì)結(jié)合形成聚合物，致蛋白質(zhì)變性、酶活性喪失:破壞脂類代謝，自由基反應(yīng)可引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化的鏈?zhǔn)阶杂苫�反�?yīng):損傷生物膜，自由基和活性氧首先攻擊生物膜的不飽和脂肪酸，使膜的流動(dòng)性下降，膜蛋白聚合使生物膜的完整性遭到破壞。嚴(yán)重者，溶酶體膜破壞，溶酶體釋放，細(xì)胞溶解破壞死亡；誘導(dǎo)多種疾病的發(fā)生:迄今發(fā)現(xiàn)，氧中毒、炎癥、免疫失調(diào)、衰老、中毒病、心血、管系統(tǒng)疾病、肺病、肝病、胃腸道疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、肌肉萎縮等均與自由基代謝異常有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中毒后在胸腺、脾、法氏囊內(nèi)的SOD值減少，MDA值增加，T-AOC值減少，表明在胸腺、脾、法氏囊內(nèi)清除MDA的能力減弱，痢菌凈在胸腺、脾、法氏囊內(nèi)通過(guò)某些反應(yīng)產(chǎn)生了自由基，影響了自由基的代謝，從而使自由基增多。機(jī)體免疫組織內(nèi)，含有大量的自由基，生物膜被大量的自由基破壞，使免疫組織喪失了免疫功能，無(wú)法產(chǎn)生可以清除自由基的SOD，引起免疫失調(diào)。自由基使機(jī)體更容易老化，各個(gè)組織功能減弱。